十八烷基硅烷鍵合硅膠柱利用吸附原理,即利用硅膠對中藥混合物中各種成分吸附能力的差異,而使混合物中各成分得以分離的色譜方法。
十八烷基硅烷鍵合硅膠柱層析操作裝柱的方法:
裝柱前柱底要墊一層脫脂棉以防吸附劑外漏。具體有干法裝柱和濕法裝柱兩種方法:
1.干法裝柱:將硅膠通過漏斗裝入柱內,中間不應間斷,形成一細流慢慢加入管內。也可用橡皮槌輕輕敲打柱硅膠柱使硅膠裝填連續(xù)均勻、緊密。柱裝好后,打開下端活塞,然后倒入洗脫劑洗脫以排盡柱內空氣,并保持一定液面。
2.濕法裝柱:將zui初準備使用的洗脫劑裝入柱內,打開下端活塞,使洗脫劑緩慢流出。然后把硅膠慢慢連續(xù)不斷地倒入柱內(或將硅膠與適量洗脫劑調成混懸液慢慢加入柱內),硅膠依靠重力和洗脫劑的帶動,在柱內自由沉降,此間要不斷把流出的洗脫劑加回柱內保持一定的液面,直至把硅膠加完并在柱內沉降不再變動為止。然后在硅膠上面加一小片濾紙或少許脫脂棉。根據加樣量控制洗脫劑液面至一定高度。
注意:
1.柱色譜分離能力比薄層分離能力強,效果更好,尤其對結構相似、性質接近、采用薄層難以分離的成分分離效果好。
2.洗柱子能不用含水的混合溶劑,就盡量不要用。